1. Klasifikacija
Gelio elektroforezė skirstoma į vertikalius tipus (įskaitant koloninius gelius ir plokščių gelius) ir horizontalius (daugiausia plokščių gelius) (6-18 pav.). Paprastai vertikalus atskyrimas yra šiek tiek pranašesnis už horizontalųjį, tačiau horizontalus gelio paruošimas turi mažiausiai keturis privalumus: po visu geliu yra atrama, leidžianti naudoti mažos koncentracijos agarozę; galima paruošti skirtingų specifikacijų agarozės gelio plokšteles; gelio paruošimas ir mėginio pakrovimas yra patogesnis; elektroforezės kamerą lengva sukonstruoti ir ji yra ekonomiška. Kadangi horizontali elektroforezė atliekama, kai agarozės gelio plokštelė yra visiškai panardinta maždaug 1 mm žemiau elektroforezės buferio paviršiaus, ji taip pat vadinama panardinta elektroforeze.
Elektroforezės bakas DYCP-31DN, skirtas agarozės gelio elektroforezei
2. Buferinė sistema
Atskirdami nukleino rūgštis, dauguma sistemų naudoja ištisines sistemas. Dažniausiai naudojami elektroforezės buferiai yra TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l boro rūgšties, 0,0024 mol/l EDTA) ir THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/L). natrio acetatas, 0,0018 mol/L EDTA) buferis. Šie buferiai paprastai ruošiami kaip 10 kartų pradiniai tirpalai ir naudojami praskiedžiami iki reikiamos koncentracijos. Linijinės ir žiedinės DNR migracijos greitis agarozės gelyje skiriasi priklausomai nuo naudojamo buferio. THE buferyje linijinės DNR migracijos greitis yra didesnis nei žiedinės DNR, o TBE buferyje yra atvirkščiai.
3.Agarozės gelio paruošimas
(1) Horizontaliojo agarozės gelio paruošimas
a) Paruoškite reikiamos koncentracijos agarozės gelį, naudodami 1x elektroforezės buferį.
b) Pakaitinkite agarozę verdančio vandens vonelėje, magnetinėje maišyklėje arba mikrobangų krosnelėje, kad visiškai ištirptų. Agarozės tirpalą atvėsinkite iki 55°C ir įpilkite etidžio bromido (EB) dažų iki galutinės 0,5 μg/ml koncentracijos.
(c) Stiklo arba akrilo plokštelių kraštus užsandarinkite nedideliu kiekiu agarozės gelio, pridėkite šukas ir padėkite šukų dantis maždaug 0,5–1,0 mm virš plokštelės.
d) Išlydytą agarozės gelio tirpalą nuolat pilkite į stiklinę arba akrilo plokštelės formą (storis priklauso nuo DNR mėginio tūrio), vengiant oro burbuliukų. Leiskite jam natūraliai sustingti kambario temperatūroje.
e) Atsargiai nuimkite šukas, kai jos visiškai sukietės. Į gelio baką įpilkite atitinkamą elektroforezės buferio kiekį, užtikrindami, kad gelio plokštelė būtų panardinta maždaug 1 mm žemiau elektroforezės buferio paviršiaus.
(2) Vertikalios agarozės gelio paruošimas
a) Nuvalykite riebalus arba likučius nuo stiklo plokščių plaunant etanoliu.
(b) Įdėkite tarpiklio plokštes tarp priekinės ir galinės užtvankos, sulygiuokite tarpiklių plokščių kraštus su priekine ir galine užtvanka ir pritvirtinkite spaustukais.
c) Įpilkite 2% agarozės 1x buferyje tarp tarpiklių plokštelių kraštų, kad susidarytų 1 cm aukščio agarozės kamštis gelio liejimo kameros apačioje.
d) Supilkite norimos koncentracijos ištirpintą agarozės gelį, paruoštą 1x buferyje, į gelio kamerą iki 1 cm žemiau viršaus.
(e) Įdėkite šukas taip, kad po šukos dantimis nepaliktų oro burbuliukų. Kartais vėsinant agarozės gelį prie šukos dantų gali atsirasti raukšlių; tokiais atvejais tiesiog įdėkite šiek tiek ištirpintos agarozės viršuje, kad ji sustingtų.
(f) Nuimkite šukas. Norėdami išvengti buferio nutekėjimo į įkrovimo angą, užsandarinkite jungtį tarp agarozės gelio plokštelės ir elektroforezės kameros 2% agarozės ir įpilkite reikiamą buferio kiekį.
(g) Į gelio kamerą įpilkite 1x elektroforezės buferio.
h) atsargiai įdėkite DNR mėginius į agarozės gelį, esantį po buferiu.
Daugiau informacijos apie pagrindines žinias apie agarozės gelio elektroforezę pasidalinsime kitą savaitę. Norite, kad ši informacija būtų naudinga jūsų eksperimentui.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) daugiau nei 50 metų specializuojasi elektroforezės prietaisų gamyboje su savo profesionalia technine komanda ir MTEP centru. Turime patikimą ir išbaigtą gamybos liniją nuo projektavimo iki patikrinimo ir sandėlį bei rinkodaros pagalbą. Mūsų pagrindiniai produktai yra elektroforezės elementas (bakas / kamera), elektroforezės maitinimo šaltinis, mėlynas LED šviestuvas, UV peršvietimas, gelio vaizdo ir analizės sistema ir kt.
Dabar ieškome partnerių, laukiame tiek OEM elektroforezės bako, tiek platintojų.
Jei turite kokių nors mūsų produktų pirkimo planų, nedvejodami susisiekite su mumis. Galite atsiųsti mums žinutę el[apsaugotas el. paštas]arba[apsaugotas el. paštas], arba skambinkite mums +86 15810650221 arba pridėkite Whatsapp +86 15810650221 arba Wechat: 15810650221.
Nuskaitykite QR kodą, kad pridėtumėte „Whatsapp“ arba „WeChat“.
Paskelbimo laikas: 2023-12-07