Kometos tyrimas: jautri DNR pažeidimo aptikimo ir taisymo technika

Comet Assay (vienaląstelinė gelio elektroforezė, SCGE) yra jautri ir greita technika, pirmiausia naudojama atskirų ląstelių DNR pažeidimams aptikti ir taisyti. Pavadinimas „Comet Assay“ kilęs iš būdingos į kometą panašios formos, kuri atsiranda rezultatuose: ląstelės branduolys sudaro „galvą“, o pažeisti DNR fragmentai migruoja, sukurdami kometą primenančią „uodegą“.

Principas

„Comet Assay“ veikimo principas pagrįstas DNR fragmentų migracija elektriniame lauke. Nepažeista DNR lieka ląstelės branduolyje, o pažeista arba suskaidyta DNR migruoja link anodo, sudarydama kometos „uodegą“. Uodegos ilgis ir intensyvumas yra tiesiogiai proporcingi DNR pažeidimo dydžiui.

Procedūra

1. Ląstelių paruošimas: Tiriamos ląstelės sumaišomos su žemos lydymosi temperatūros agaroze ir paskirstomos ant mikroskopo stiklelių, kad susidarytų vienodas sluoksnis.
2. Ląstelių lizė: stikleliai panardinami į lizės tirpalą, kad būtų pašalinta ląstelės membrana ir branduolio membrana, atskleidžiama DNR.
3. Elektroforezė: stikleliai dedami į elektroforezės kamerą šarminėmis arba neutraliomis sąlygomis. Pažeisti DNR fragmentai, veikiami elektrinio lauko, migruoja link teigiamo elektrodo.
4. Dažymas: Po elektroforezės stikleliai nudažomi fluorescenciniais dažais (pvz., etidžio bromidu), kad būtų galima vizualizuoti DNR.
5. Mikroskopinė analizė: Naudojant fluorescencinį mikroskopą arba specializuotą programinę įrangą, analizuojamos kometos formos ir išmatuojami parametrai, tokie kaip uodegos ilgis ir intensyvumas.

Vaizdas iš biorender

Duomenų analizė

Comet Assay rezultatai vertinami pagal kelis pagrindinius parametrus:

• Uodegos ilgis: nurodo atstumą, kurį DNR migruoja, nurodant DNR pažeidimo mastą.
• Uodegos DNR turinys: DNR, migruojančios į uodegą, procentas, dažnai naudojamas kaip kiekybinis DNR pažeidimo matas.
• Alyvuogių uodegos akimirka (OTM): Sujungia uodegos ilgį ir uodegos DNR turinį, kad būtų galima gauti išsamesnį DNR pažeidimo matą.

Programos

1. Genotoksiškumo tyrimai: Comet Assay yra plačiai naudojamas vertinant cheminių medžiagų, vaistų ir spinduliuotės poveikį ląstelių DNR, todėl tai yra pagrindinė genotoksiškumo tyrimų priemonė.
2. Aplinkos toksikologija: padeda analizuoti aplinkos teršalų poveikį organizmų DNR, suteikiant įžvalgų apie ekosistemų saugumą.
3. Medicininiai ir klinikiniai tyrimai: Comet Assay naudojamas tiriant DNR atstatymo mechanizmus, vėžį ir kitas su DNR susijusias ligas. Taip pat įvertinamas vėžio gydymo, pvz., radioterapijos ir chemoterapijos, poveikis DNR.
4. Maisto ir žemės ūkio mokslai: Naudojamas pesticidų, maisto priedų ir kitų medžiagų saugai įvertinti ir jų toksiniam poveikiui gyvūnų modeliuose tirti.

Privalumai

• Didelis jautrumas: Gali aptikti žemą DNR pažeidimo lygį.
• Paprasta operacija: Technika nesudėtinga, todėl tinka didelio našumo atrankai.
• Platus pritaikymas: Jis gali būti taikomas įvairių tipų ląstelėms, įskaitant gyvūnų ir augalų ląsteles.
• Kiekybinio įvertinimo iššūkiai: Teikiant kokybinius duomenis apie DNR pažeidimus, kiekybinė analizė labai priklauso nuo programinės įrangos ir vaizdo analizės metodų.
• Eksperimento sąlygos: Rezultatams įtakos gali turėti tokie veiksniai kaip elektroforezės laikas ir pH, todėl reikia atidžiai kontroliuoti eksperimentines sąlygas.

Apribojimai

„Comet Assay“ yra neįkainojama priemonė atliekant biomedicininius tyrimus, aplinkos mokslą ir vaistų kūrimą dėl savo lankstumo ir didelio jautrumo nustatant DNR pažeidimus ir taisant. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)siūlo horizontalią elektroforezės kamerą kometų tyrimui. Kviečiame susisiekti su mumis ir aptartiKometos tyrimasprotokolas.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) daugiau nei 50 metų specializuojasi elektroforezės prietaisų gamyboje su savo profesionalia technine komanda ir MTEP centru. Turime patikimą ir išbaigtą gamybos liniją nuo projektavimo iki patikrinimo ir sandėlį bei rinkodaros pagalbą. Mūsų pagrindiniai produktai yra elektroforezės elementas (bakas / kamera), elektroforezės maitinimo šaltinis, mėlynas LED peršvietimas, UV transiliuminatorius, gelio vaizdo ir analizės sistema ir tt Mes taip pat tiekiame laboratorinius instrumentus, tokius kaip PGR prietaisas, sūkurinis maišytuvas ir centrifuga laboratorijai.

Jei turite kokių nors mūsų produktų pirkimo planų, nedvejodami susisiekite su mumis. Galite atsiųsti mums žinutę el[apsaugotas el. paštas]arba[apsaugotas el. paštas], arba skambinkite mums +86 15810650221 arba pridėkite Whatsapp +86 15810650221 arba Wechat: 15810650221.

Nuskaitykite QR kodą, kad pridėtumėte „Whatsapp“ arba „WeChat“.