Principas
Celiuliozės acetato plėvelės elektroforezė yra elektroforezės metodas, kai kaip atrama naudojama celiuliozės acetato plėvelė. Reiškinys, kai įkrautos dalelės, veikiamos elektrinio lauko, juda link priešingo elektrodo, vadinamas elektroforeze. Kadangi kiekvienas baltymas turi specifinį izoelektrinį tašką, jei baltymas dedamas į tirpalą, kurio pH yra žemesnis už jo izoelektrinį tašką, baltymas bus teigiamai įkrautas ir judės link neigiamo elektrodo. Priešingai, jis pereina į teigiamą polių. Kadangi baltymų molekulių judėjimo elektriniame lauke greitis yra susijęs su jų krūviu, molekulių forma ir dydžiu, skirtingus baltymus galima atskirti elektroforezės būdu. Serumo sudėtyje yra įvairių baltymų, kurių visų izoelektriniai taškai yra 7,5 ar mažesnio pH. Kai serumas dedamas į pH 8,6 buferį elektroforezei atlikti, visi serumo baltymai yra neigiamai įkrauti ir elektriniame lauke judės į teigiamą pusę. Kadangi įvairūs serumo baltymai turi skirtingą krūvį esant tam pačiam pH, molekulinės dalelės yra skirtingo dydžio, todėl skiriasi ir migracijos greitis, todėl jos yra atskiriamos elektroforezės būdu. Serumo baltymų izoelektriniai taškai ir molekulinės masės pateikti toliau esančioje lentelėje:
| Baltymai | Izoelektriniai taškai (PI) | Molekulinė masė |
| Albuminas | 4.88 | 69 000 |
| α1-glulinas | 5.00 val | 200 000 |
| α2-glulinas | 5.06 | 300 000 |
| β-glulinas | 5.12 | 9 000–150 000 |
| γ-glulinas | 6,85 ~ 7,50 | 156 000–300 000 |
Eksperimentas skirtas atskirti skirtingus baltymus kraujo serume, naudojant celiuliozės acetato membraną (sutrump. CAM) kaip palaikomąją terpę. CAM yra tam tikras putplastisegeros vienodos plėvelės, kurios storis yra 0,1–1,5 mm, kuri turi tam tikrą vandens sugėrimą.
Medžiagos, instrumentai ir reagentai CAM elektroforezei
Pavyzdžiai:sveiko žmogaus kraujo serumas
Priemonė:maitinimo šaltinis DYY-6C, elektroforezės bakas DYCP-38C, puikus mėginio pakrovimas WD-9404
Reagentai
1) celiuliozės acetato membrana 7X9cm
2) PH 8,6 barbitolio buferinis tirpalas (jonų stiprumas 0,05–0,09, tai yra 0,06 tris kartus): paimkite 1,84 g dietilo barbitūro rūgšties, tada paimkite 1,03 g dietilo natrio pentobarbitalio, įpilkite šiek tiek distiliuoto vandens, kad ištirptų. iki 1000 ml;
3) Dėmė: Ponceau S 0,2g, Trichloracto 3g, įpilkite 100ml distiliuoto vandens;
4) TBS/T arba PBS/T: 45ml 95% etanolio, 5ml ledinės acto rūgšties, įpilkite 50ml distiliuoto vandens;
5) Valymo tirpalas: 70 ml bevandenio etanolio, 30 ml ledinės acto rūgšties.
Eksperimento metodasd
1) Paruoškite membraną: 30min-8h panardinkite membraną į barbitolio buferinį tirpalą ir išimkite, pašalinkite perteklinį tirpalą sugeriančiu popieriumi.
2) Mėginių įkėlimas: Atskirkite šiurkščią ir lygiąją membranos pusę ir pažymėkite liniją 1,5 cm atstumu nuo viršutinio galo šiurkščioje pusėje. Įdėkite mėginius puikiu mėginių įkėlimo įrankiu iš grubios pusės. Pastaba: Mėginiai turi būti dedami ant grubios membranos pusės. Kai serumo mėginiai visiškai įsiskverbia į membraną, apverskite membraną, šiurkščia puse (su mėginiais) padėkite žemyn į rezervuarą, o galas su mėginiais įdedamas į neigiamą elektrodą.
3) Elektroforezė: Įjunkite maitinimą, 0.4～0,6 m A/cm membrana, veikimo laikas 30-45 min. Atlikę elektroforezę, išjunkite maitinimą.
4) Ištepkite ir išvalykite: išimkite membraną iš bako ir panardinkiteit į dažų tirpalą 5 min., o tada valykite jį valymo tirpale 3–4 kartus, kol fono spalva taps skaidri. Serumo baltymai turėtų būti rodomi juostose ir paprastai yra penkios zonos, kurios sudaro viršutinį galą iki pažymėtos linijos: albuminas, α1-gluulinas, α2-gluulinas, β-gluulinas, γ-gluulinas.
5) Konservavimas: uždėkite sausą elektroforezęjuostavalymo tirpale 10-15 minučių, o tada išimkite ir užklijuokite ant švaraus stiklo, išdžiūvus taps skaidria plėvelejuosta.
EksperimentuokiteRezultatas
Serumo mėginių atskyrimo efektas yra geras ir nėra juostos uodegos reiškinio. Rezultatų pakartojamumas skiriasi dėl bandymo procedūrų ir eksperimentuotojo metodų, o pakartojamumas yra didelis.
Išvada
Greita klinikinė elektroforezės aptikimo sistema (Elektroforezės bakasDYCP-38C,maitinimo šaltinisDYY-6C ir aukščiausios kokybės mėginio pakrovimas WD-9404), kurį pagamino mūsųbendrovė Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdatitinka eksperimentinius reikalavimus,irrezultatai atkuriami, paprasti ir greiti, tinkamimokymastyrimai.
Pekinas LiuyiBiotechnology Co., Ltd specializuojasi gaminant elektroforezės produktus gyvosios gamtos mokslų pramonei, kurituri daugiau nei 50 metų istoriją Kinijoje ir įmonė gali tiekti stabilius ir aukštos kokybės produktus visame pasaulyje. Ilgus metus vystantis, vertas jūsų pasirinkimo!
Dabar ieškome partnerių, laukiame tiek OEM elektroforezės bako, tiek platintojų.
Norėdami gauti daugiau informacijos apie mus, susisiekite su mumis el[apsaugotas el. paštas]arba[apsaugotas el. paštas].
Paskelbimo laikas: 2022-11-14