Įvadas
Gelio elektroforezė yra pagrindinė molekulinės biologijos technika, plačiai naudojama baltymų, nukleorūgščių ir kitų makromolekulių atskyrimui. Norint gauti tikslius ir atkuriamus rezultatus, labai svarbu tinkamai kontroliuoti mėginio tūrį, įtampą ir elektroforezės laiką.Mūsų laboratorijos kolega siūlogeriausios praktikos, kaip valdyti šiuos parametrus SDS-PAGE gelio elektroforezės metu.
Beijing Liuyi Biotechnology gelio elektroforezės produktai
Mėginio tūris: nuoseklumo užtikrinimas
Atliekant SDS-PAGE elektroforezę, mėginio tūris yra pagrindinis veiksnys, galintis labai paveikti jūsų rezultatų skiriamąją gebą. Į šulinėlį paprastai rekomenduojama įpilti 10 µl viso baltymo. Siekiant užtikrinti nuoseklumą ir išvengti mėginių difuzijos tarp gretimų šulinių, svarbu į bet kurį tuščią šulinį įpilti vienodo tūrio 1x pakrovimo buferio. Ši atsargumo priemonė padeda išvengti mėginių išplitimo į gretimas juostas, o tai gali įvykti, jei šulinys paliekamas tuščias.
Prieš įkeldami mėginius, visada pradėkite pridėdami molekulinės masės žymeklį į vieną šulinėlį. Tai leidžia lengvai nustatyti baltymų dydžius po elektroforezės.
Įtampos valdymas: balansavimo greitis ir skiriamoji geba
Elektroforezės metu naudojama įtampa tiesiogiai veikia tiek mėginių migracijos per gelį greitį, tiek atskyrimo skiriamąją gebą. Naudojant SDS-PAGE, patartina pradėti nuo žemos, maždaug 80 V įtampos. Ši pradinė žema įtampa leidžia mėginiams lėtai ir tolygiai migruoti, koncentruojant juos į aštrią juostą, kai jie patenka į atskyrimo gelį.
Kai mėginiai visiškai patenka į atskyrimo gelį, įtampą galima padidinti iki 120 V. Ši aukštesnė įtampa pagreitina migraciją, užtikrindama, kad baltymai būtų efektyviai atskirti pagal jų molekulinę masę. Labai svarbu stebėti bromfenolio mėlynojo dažų fronto eigą, o tai rodo elektroforezės užbaigimą. Geliams, kurių koncentracija 10-12%, paprastai pakanka 80-90 minučių; tačiau 15 % gelių gali tekti šiek tiek pailginti veikimo laiką.
Laiko valdymas: žinojimas, kada sustoti
Laikas yra dar vienas svarbus gelio elektroforezės veiksnys. Naudojant gelį per ilgai arba per trumpai, atsiskyrimas gali būti neoptimalus. Bromfenolio mėlynojo dažiklio migracija yra naudingas rodiklis: kai jis pasiekia gelio dugną, dažniausiai laikas sustabdyti bėgimą. Standartiniams geliams, pvz., 10–12 %, paprastai pakanka maždaug 80–90 minučių elektroforezės trukmės. Didesnio procento gelių, pvz., 15%, veikimo laikas turėtų būti pratęstas, kad būtų užtikrintas visiškas baltymų atskyrimas.
Buferio valdymas: pakartotinis buferių naudojimas ir paruošimas
Elektroforezės buferis gali būti pakartotinai naudojamas 1–2 kartus, atsižvelgiant į specifines jūsų laboratorijos sąlygas. Tačiau siekiant optimalių rezultatų, rekomenduojama paruošti šviežią 10x buferį ir praskiesti jį prieš pat naudojimą. Tai užtikrina, kad buferis išlaikys savo efektyvumą, todėl elektroforezės rezultatai yra patikimesni.
Beijing Liuyi Biotechnology gelio elektroforezės produktai
Kruopščiai kontroliuodami mėginio tūrį, įtampą ir elektroforezės laiką, galite žymiai pagerinti gelio elektroforezės rezultatų tikslumą ir atkuriamumą. Taikydami šią geriausią praktiką savo laboratoriniame darbe galėsite pasiekti aiškesnes ir ryškesnes juostas, o tai leis gauti geresnius duomenis tolesniam tyrimui.
Jei turite daugiau gerų metodų, kaip optimizuoti gelio elektroforezės eksperimentą, kviečiame diskutuoti su mumis!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) daugiau nei 50 metų specializuojasi elektroforezės prietaisų gamyboje su savo profesionalia technine komanda ir MTEP centru. Turime patikimą ir išbaigtą gamybos liniją nuo projektavimo iki patikrinimo ir sandėlį bei rinkodaros pagalbą. Mūsų pagrindiniai produktai yra elektroforezės elementas (bakas / kamera), elektroforezės maitinimo šaltinis, mėlynas LED peršvietimas, UV transiliuminatorius, gelio vaizdo ir analizės sistema ir tt Mes taip pat tiekiame laboratorinius instrumentus, tokius kaip PGR prietaisas, sūkurinis maišytuvas ir centrifuga laboratorijai.
Jei turite kokių nors mūsų produktų pirkimo planų, nedvejodami susisiekite su mumis. Galite atsiųsti mums žinutę el[apsaugotas el. paštas]arba[apsaugotas el. paštas], arba skambinkite mums +86 15810650221 arba pridėkite Whatsapp +86 15810650221 arba Wechat: 15810650221.
Nuskaitykite QR kodą, kad pridėtumėte „Whatsapp“ arba „WeChat“.
Paskelbimo laikas: 2024-08-20