Praėjusią savaitę pasidalijome keliais svarstymais, susijusiais su celiuliozės acetato membranos elektroforezės naudojimu, ir šiandien baigsime šią temą.
Pasirinkimas iš Buferio koncentracija
Buferio koncentracija, naudojama celiuliozės acetato membranos elektroforezei, paprastai yra mažesnė nei naudojama popieriaus elektroforezei. Dažniausiai naudojamas pH 8,6BArbitinis buferis paprastai pasirenkamas nuo 0,05 mol/L iki 0,09 mol/L. Parenkant koncentraciją, atliekamas preliminarus nustatymas. Pavyzdžiui, jei membranos juostelės ilgis tarp elektrodų elektroforezės kameroje yra 8-10 cm, vienam membranos ilgio centimetrui reikalinga 25 V įtampa, o srovės intensyvumas turi būti 0,4-0,5 mA vienam membranos pločio centimetrui. Jei elektroforezės metu šios vertės nepasiekiamos arba viršijamos, buferio koncentraciją reikia padidinti arba praskiesti.
Dėl pernelyg mažos buferio koncentracijos juostos greitai judės ir padidės juostos plotis. Kita vertus, pernelyg didelė buferio koncentracija sulėtins juostos migraciją, todėl bus sunku atskirti tam tikras atskyrimo juostas.
Pažymėtina, kad atliekant celiuliozės acetato membranos elektroforezę per mėginį praleidžiama didelė srovės dalis, kuri generuoja nemažą šilumos kiekį. Kartais pasirinkta buferio koncentracija gali būti laikoma tinkama. Tačiau esant padidėjusiai aplinkos temperatūrai arba naudojant didesnę įtampą, dėl karščio gali sustiprėti vandens garavimas, dėl to gali susidaryti pernelyg didelė buferio koncentracija ir netgi išsausėti membrana.
Mėginio tūris
Celiuliozės acetato membranos elektroforezės metu mėginio tūrį lemia įvairūs veiksniai, įskaitant elektroforezės sąlygas, paties mėginio savybes, dažymo metodus ir aptikimo būdus. Paprastai kuo jautresnis aptikimo metodas, tuo mažesnis gali būti mėginio tūris, o tai naudinga atskiriant. Jei mėginio tūris yra per didelis, elektroforetinio atskyrimo modeliai gali būti neaiškūs, o dažymas taip pat gali užtrukti. Tačiau kiekybiškai analizuojant atskirtas nudažytas juostas naudojant eliuavimo kolorimetrinius aptikimo metodus, mėginio tūris neturėtų būti per mažas, nes dėl to tam tikrų komponentų absorbcijos vertės gali sumažėti, todėl apskaičiuojant jų kiekį gali atsirasti didesnės paklaidos. Tokiais atvejais mėginio tūris turėtų būti atitinkamai padidintas.
Paprastai mėginio tūris, pridedamas prie kiekvieno mėginio uždėjimo linijos centimetro, svyruoja nuo 0,1 iki 5 μL, o tai atitinka 5–1000 μg mėginio kiekį. Pavyzdžiui, atliekant įprastą serumo baltymų elektroforezės analizę, mėginio tūris, įpilamas į kiekvieną purškimo linijos centimetrą, paprastai neviršija 1 μL, atitinkančio 60–80 μg baltymų. Tačiau analizuojant lipoproteinus arba glikoproteinus naudojant tą patį elektroforezės metodą, reikia atitinkamai padidinti mėginio tūrį.
Apibendrinant, tinkamiausias mėginio tūris turėtų būti parinktas atsižvelgiant į konkrečias sąlygas, atliekant preliminarius eksperimentus.
Dažymo tirpalo pasirinkimas
Atskirtos juostos celiuliozės acetato membranos elektroforezės metu paprastai nudažomos prieš aptikimą. Skirtingiems mėginio komponentams reikalingi skirtingi dažymo metodai, o celiuliozės acetato membranos elektroforezei tinkami dažymo metodai gali būti netinkami filtravimo popieriui.
Yra trys pagrindiniai dažymo tirpalo pasirinkimo principaiceliuliozės acetato membrana. Pirma,Pirmenybė turėtų būti teikiama vandenyje tirpiems dažams, o ne tirpiems alkoholyje, kad būtų išvengta membranos susitraukimo ir deformacijos, kurią sukelia pastarųjų dažymo tirpalas. Po dažymo svarbu membraną nuplauti vandeniu ir sutrumpinti dažymo trukmę. Priešingu atveju membrana gali susiraityti arba susitraukti, o tai turės įtakos tolesniam aptikimui.
Antra, pageidautina pasirinkti dažus, turinčius stiprų dažymo afinitetą mėginiui. Atliekant serumo baltymų celiuliozės acetato membranos elektroforezę, amino black 10B dažniausiai naudojamas dėl stipraus dažymo afiniteto įvairiems serumo baltymų komponentams ir stabilumo.
Trečia, reikia pasirinkti patikimus kokybiškus dažus. Kai kurie dažai, nors ir turi tą patį pavadinimą, gali turėti priemaišų, dėl kurių po dažymo fonas tampa ypač tamsus. Tai netgi gali sulieti iš pradžių gerai atskirtas juostas, todėl jas sunku atskirti.
Galiausiai, svarbu pasirinkti dažymo tirpalo koncentraciją. Teoriškai gali atrodyti, kad didesnė dažymo tirpalo koncentracija lemtų kruopštesnį mėginio komponentų dažymą ir geresnius dažymo rezultatus. Tačiau taip nėra. Ryšio afinitetas tarp mėginio komponentų ir dažų turi tam tikrą ribą, kuri nedidėja didėjant dažymo tirpalo koncentracijai. Priešingai, dėl pernelyg didelės dažymo tirpalo koncentracijos ne tik švaistomi dažai, bet ir sunku pasiekti aiškų foną. Be to, kai spalvos intensyvumas pasiekia tam tikrą didžiausią vertę, dažų absorbcijos kreivė nesilaiko tiesinio ryšio, ypač atliekant kiekybinius matavimus. Atliekant celiuliozės acetato membranos elektroforezę, dažymo tirpalo koncentracija paprastai yra mažesnė nei naudojama popieriaus elektroforezei.
Išsami informacija apie Pekino Liuyi biotechnologiją's celiuliozės acetato membranaelektroforezės bakas ir jo elektroforezės taikymas, apsilankykite čia:
lSerumo baltymų atskyrimo celiuliozės acetato membrana eksperimentas
lCeliuliozės acetato membranos elektroforezė
lNaudojant celiuliozės acetato membranos elektroforezę, reikia atsižvelgti į keletą dalykų (1)
Jei turite kokių nors mūsų produktų pirkimo planų, nedvejodami susisiekite su mumis. Galite atsiųsti mums žinutę el[apsaugotas el. paštas]arba[apsaugotas el. paštas], arba skambinkite mums +86 15810650221 arba pridėkite Whatsapp +86 15810650221 arba Wechat: 15810650221.
Nuoroda:Elektroforezė (antrasis leidimas), p. Li
Paskelbimo laikas: 2023-06-06