Poliakrilamido gelio elektroforezė
Gelio elektroforezė yra pagrindinė biologinių disciplinų laboratorijų metodika, leidžianti atskirti makromolekules, tokias kaip DNR, RNR ir baltymai. Skirtingos atskyrimo terpės ir mechanizmai leidžia efektyviau atskirti šių molekulių pogrupius, išnaudojant jų fizines savybes. Ypač baltymų atveju dažniausiai pasirenkama poliakrilamido gelio elektroforezė (PAGE).
PAGE yra metodas, atskiriantis makromolekules, pvz., baltymus, remiantis jų elektroforeziniu mobilumu, ty analičių gebėjimu judėti link priešingo krūvio elektrodo. PAGE tai lemia molekulės krūvis, dydis (molekulinė masė) ir forma. Analitės juda per poras, susidariusias poliakrilamido gelyje. Skirtingai nuo DNR ir RNR, baltymų krūvis skiriasi priklausomai nuo įtrauktų aminorūgščių, kurios gali turėti įtakos jų veikimui. Amino rūgščių stygos taip pat gali sudaryti antrines struktūras, kurios turi įtakos jų matomam dydžiui ir atitinkamai kaip jos gali judėti per poras. Todėl kartais gali būti pageidautina denatūruoti baltymus prieš elektroforezę, kad būtų galima juos linearizuoti, jei reikia tikslesnio dydžio įvertinimo.
SDS PUSLAPAS
Natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforezė yra metodas, naudojamas atskirti baltymų molekules, kurių masė yra nuo 5 iki 250 kDa. Baltymai atskiriami tik pagal jų molekulinę masę. Natrio dodecilsulfatas, anijoninė aktyvioji paviršiaus medžiaga, pridedama ruošiant gelius, kurie užmaskuoja vidinius baltymų mėginių krūvius ir suteikia jiems panašų krūvio ir masės santykį. Paprastais žodžiais tariant, jis denatūruoja baltymus ir suteikia jiems neigiamą krūvį.
Gimtasis PUSLAPIS
Native PAGE yra metodas, kai baltymams atskirti naudojami nedenatūruoti geliai. Skirtingai nuo SDS PAGE, ruošiant gelius denatūruojančios medžiagos nededamos. Dėl to baltymų atskyrimas vyksta pagal baltymų krūvį ir dydį. Taikant šį metodą, baltymų konformacija, sulankstymas ir aminorūgščių grandinės yra veiksniai, nuo kurių priklauso atskyrimas. Baltymai šiame procese nepažeidžiami ir gali būti atgauti po atskyrimo.
Kaip veikia poliakrilamido gelio elektroforezė (PAGE)?
Pagrindinis PAGE principas yra atskirti analites, elektros srove praleidžiant jas per poliakrilamido gelio poras. Norint tai pasiekti, akrilamido-bisakrilamido mišinys polimerizuojamas (poliakrilamidas), pridedant amonio persulfato (APS). Reakcija, kurią katalizuoja tetrametiletilendiaminas (TEMED), sudaro tinklinę struktūrą su poromis, per kurias gali judėti analitės (2 pav.). Kuo didesnis viso akrilamido procentas yra gelyje, tuo mažesnis porų dydis, taigi, tuo mažesni baltymai galės praeiti. Akrilamido ir bisakrilamido santykis taip pat turės įtakos porų dydžiui, tačiau jis dažnai išlieka pastovus. Mažesni porų dydžiai taip pat sumažina greitį, kuriuo maži baltymai gali judėti per gelį, pagerindami jų skiriamąją gebą ir neleisdami jiems greitai nutekėti į buferį, kai veikia srovė.
Poliakrilamido gelio elektroforezės įranga
Gelio elektroforezės elementas (bakas / kamera)
Poliakrilamido gelio elektroforezės (PAGE) gelio bakas skiriasi nuo agarozės gelio bako. Agarozės gelio bakas yra horizontalus, o PAGE bakas yra vertikaliai. Atliekant vertikalią elektroforezės kamerą (bakas/kamerą), plonas gelis (paprastai 1,0 mm arba 1,5 mm) pilamas tarp dviejų stiklinių plokščių ir tvirtinamas taip, kad gelio apačia būtų panardinta į buferį vienoje kameroje, o viršus – į buferį. kitoje kameroje. Kai veikia srovė, nedidelis buferio kiekis migruoja per gelį iš viršutinės kameros į apatinę. Su tvirtais spaustukais, užtikrinančiais, kad agregatas išliktų vertikalioje padėtyje, įranga palengvina greitą gelio tekėjimą ir tolygų aušinimą, todėl susidaro skirtingos juostos.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) gamina įvairių dydžių poliakrilamido gelio elektroforezės elementus (cisternas/kameras). Modeliai DYCZ-20C ir DYCZ-20G yra vertikalios elektroforezės ląstelės (cisternos/kameros), skirtos DNR sekos analizei. Kai kurios vertikalios elektroforezės ląstelės (cisternos/kameros) yra suderinamos su blotavimo sistema, pvz., DYCZ-24DN, DYCZ-25D ir DYCZ-25E modeliai yra suderinami su Western bloting sistemos modeliu DYCZ-40D, DYCZ-40G ir DYCZ-40F, kurie naudojami baltymo molekulei pernešti iš gelio į membraną. Po SDS-PAGE elektroforezės Western Blotting yra metodas, leidžiantis aptikti specifinį baltymą baltymų mišinyje. Šias blotingo sistemas galite pasirinkti pagal eksperimentinius reikalavimus.
Elektroforezės maitinimo šaltinis
Norėdami aprūpinti elektrą gelio paleidimui, jums reikės elektroforezės maitinimo šaltinio. „Liuyi Biotechnology“ siūlo įvairius elektroforezės maitinimo šaltinius visoms reikmėms. Modeliai DYY-12 ir DYY-12C su aukšta stabilia įtampa ir srove gali patenkinti aukštos įtampos elektroforezės reikalavimus. Jis turi stovo, laiko nustatymo, VH ir žingsnis po žingsnio taikymo funkciją. Jie idealiai tinka IEF ir DNR sekos elektroforezei taikyti. Bendrai baltymų ir DNR elektroforezės taikymui turime modelius DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 ir tt, kurie taip pat yra karšto pardavimo maitinimo šaltiniai su elektroforezės elementais (cisternomis/kameromis). Jie gali būti naudojami vidutinės ir žemos įtampos elektroforezei, pavyzdžiui, mokyklos laboratorijoje, ligoninės laboratorijoje ir pan. Daugiau maitinimo šaltinių modelių rasite mūsų svetainėje.
Prekės ženklas „Liuyi“ turi daugiau nei 50 metų istoriją Kinijoje ir įmonė gali tiekti stabilius ir aukštos kokybės produktus visame pasaulyje. Ilgus metus tobulėjant, jis vertas jūsų pasirinkimo!
Norėdami gauti daugiau informacijos apie mus, susisiekite su mumis el[apsaugotas el. paštas] or [apsaugotas el. paštas].
Nuorodos, kas yra poliakrilamido gelio elektroforezė?
1. Karen Steward PhD Poliakrilamido gelio elektroforezė, kaip tai veikia, technikos variantai ir pritaikymas
Paskelbimo laikas: 2022-05-23